Efecto de MG-132 sobre la miofibrilogénesis y la ubiquitinación de GAPDH en miotubos de codorniz

Dentro del maniquí de la miofibrilogénesis de tres pasos, las miofibrillas maduras se forman a través de dos construcciones intermedias: las premiofibrillas y las miofibrillas nacientes. Ahora hemos informado recientemente de que una serie de inhibidores de la Ubiquitin Proteosome System, por ejemplo, MG-132, y DBeQ, bloquean reversiblemente el desarrollo de miofibrillas nacientes a miofibrillas maduras.


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En esta investigación se estudiaron los resultados de MG132 y DBeQ en la expresión de proteínas miofibrilares variada junto con actina, miosina suave y cadenas pesadas, tropomiosina, miomesina, y la proteína de unión de miosina-C en miotubos de codorniz embrionaria cultivadas por Western blot utilizando dos controles de carga -α-tubulina y GAPDH.

Sorprendentemente, descubrimos que MG-132 afectaba al grado de expresión de GAPDH, pero no así DBeQ. RT-PCR y qRT-PCR confirmaron ningún impacto importante de MG-132 en la transcripción de GAPDH. Los análisis bidimensionales de Western blot con extractos de células manejadas y MG-132 utilizando anticuerpos anti-ubiquitina indicaron que los miotubos tratados con MG132 presentan un signo ECL más fuerte.

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No obstante, los cálculos de Spot% y Spot quantity para todas las manchas de cada uno de los indicadores de Western blot y los geles 2D-PAGE teñidos con Coomassie confirmaron que la profundidad de la tinción en una mancha de proteína de ~39 kDa es 3,5 veces menor en el gel de los extractos manipulados con MG-132. Los análisis de espectrometría de masas reconocieron que la proteína de ~39 kDa se había teñido con Coomassie.

T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-25g Abbexa
T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-5g Abbexa
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio
T7 DNA
310-005 GeneOn
T7 DNA
310-025 GeneOn

Los análisis de espectrometría de masas reconocieron la proteína de ~39 kDa como GAPDH de codorniz.

La evaluación inmunohistoquímica de miotubos manipulados MG-132 fijados con anticuerpos anti-GAPDH confirmó la formación de grumos en profundidad, que puede ser análoga a la formación de gránulos por componentes de respuesta al estrés en células manipuladas MG132.

Este es el primer informe sobre la ubiquitinación in vivo de GAPDH. Esto puede ser importante para el ejercicio de pluriempleo de GAPDH para la adaptación de estrés en miotubos. Este texto está protegido por derechos de autor. Todos los derechos reservados.

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La reorganización de la actina en el espacio centrosomal y la sinapsis inmune regula los visitantes secretores polarizados de los cuerpos multivesiculares en los linfocitos T
La estimulación del receptor de células T induce la convergencia de los cuerpos multivesiculares en dirección al centro organizador de microtúbulos (MTOC) y la polarización del MTOC hacia la sinapsis inmunitaria (IS). Estas ocasiones dan lugar a la secreción de exosomas en el IS.

Protein A Protein
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Protein A Protein
Abbexa
Protein A protein
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Describimos aquí que en la formación de IS centrosomal espacio F-actina disminuido concomitantemente con la polarización MTOC a la IS. Los clones de células T interferidos con PKCδ confirmaron un grado sostenido de F-actina en el espacio centrosomal relacionado con la polarización defectuosa de MTOC.

Analizamos la contribución de dos proteínas reguladoras del citoesqueleto de actina, FMNL1 y paxilina, a la regulación de las redes de F-actina corticales y centrosómicas.El agotamiento de F-actina en la zona central del IS, un requisito para la polarización MTOC, estaba relacionado con la fosforilación de FMNL1 β en su zona autorreguladora C-terminal.

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La interferencia de todas las isoformas de FMNL1 impidió la polarización MTOC; sin embargo, la re-expresión de FMNL1 β restauró la polarización MTOC en un método independiente de la reorganización de la F-actina en el espacio centrosomal. Además, PKCδ-interferido clones exhibieron disminución de la fosforilación de paxillin en el MTOC, lo que sugiere otra vía de regulación del citoesqueleto de actina.

Nuestros resultados infieren que PKCδ regula la polarización MTOC y los visitantes de secreción que resulta en la secreción de exosomas en un método coordinado a través de dos vías distintas, una que implica FMNL1 β regulación y el control de la reorganización de la F-actina en el IS, y lo contrario, que comprende paxillin fosforilación sin duda el control de espacio centrosomal F-actina reorganización.

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La inhibición de la NADPH oxidasa alivia la apoptosis de las células germinales y el estrés del RE a lo largo de la isquemia testicular daño de reperfusión


La torsión y destorsión testicular (TTD) es una situación urológica grave que afecta a varones jóvenes y que se caracteriza por un daño por isquemia de reperfusión (tIRI) en el testículo como mecanismo fisiopatológico. A lo largo de la tIRI, la fabricación incontrolada de especies reactivas al oxígeno (ROS) provoca lesiones en el ADN que dan lugar a la apoptosis de las células germinales (ACG).

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La intención de la investigación es descubrir si la inhibición de la NADPH oxidasa (NOX), una fuente importante de ROS intracelulares, prevendrá la ACG inducida por la tIRI y su relación con el estrés del retículo endoplásmico (RE). Las ratas Sprague-Dawley (n = 36) se dividieron en tres equipos: simulacro, tIRI únicamente y tIRI tratado con apocinina (un inhibidor de NOX).

Las ratas presentes proceso tIRI soportaron un daño isquémico durante 1 h adoptado por Cuatro h de reperfusión. La lesión espermatogénica se evaluó histológicamente, mientras que los daños móviles se habían evaluado utilizando PCR en tiempo real, tinción de inmunofluorescencia, Western blot y ensayos bioquímicos.

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Human Cholesterol ELISA ELISA
E01A2368 BlueGene

La alteración de la espermatogénesis se relacionó con una elevada peroxidación de lípidos y proteínas y una disminución del ejercicio antioxidante de la enzima superóxido dismutasa (SOD) a causa de la tIRI. Asimismo, las elevadas roturas de doble cadena del ADN y la formación de aductos de 8-OHdG se relacionaron con la elevada fosforilación de la proteína H2AX de la respuesta a la lesión del ADN (DDR). La vía de señalización de la apoptosis ASK1/JNK también se activó en respuesta a la tIRI.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
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Goat Cholesterol ELISA ELISA
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Por último, se observó un aumento de la inmunoexpresión de las dianas de la respuesta a proteínas desdobladas (UPR): GRP78, eIF2-α1, CHOP y caspasa 12 apoyaron la presencia de estrés del RE. La inhibición de NOX mediante apocinina protegió frente a la ACG y el estrés de RE inducidos por tIRI. En conclusión, la inhibición de NOX minimizó los daños oxidativos intracelulares inducidos por tIRI que resultaron en ACG y estrés de RE.

Effect of MG-132 on myofibrillogenesis and the ubiquitination of GAPDH in quail myotubes
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Caracterización de los resultados citotóxicos in vitro de las braquidinas extraídas de Fridericia platyphylla en una línea celular de cáncer de próstata


Las braquidinas (Br) A, B y C son flavonoides extraídos de las raíces de Fridericia platyphylla (Cham.) L.G. Lohmann (sinónimo Arrabidaea brachypoda), cuyo extracto exhibió previamente un ejercicio citotóxico y antitumoral. Se utilizó la tradición celular in vitro de la línea celular de tumores de próstata humanos (PC-3) para averiguar la viabilidad celular evidenciada por MTT, carmesí imparcial y lanzamiento de LDH utilizando 9 concentraciones (0,24 a 30,72 µM) de cada brachydin.

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Un ensayo de triple tinción fluorescente evaluó el mecanismo que conduce a la pérdida de vida celular. La inestabilidad genómica y la expresión de proteínas se evaluaron mediante el ensayo cometa y la evaluación western blot, respectivamente. El nivel de oxidación profesional se analizó utilizando la sonda 5-(y 6)-clorometil-2′,7′-diclorodihidrofluoresceína diacetato (CM-H2DCFDA).

Los valores IC50 de las braquidinas BrA, BrB y BrC habían sido de 23,41, 4,28 y 4,44 µM, respectivamente, y todos los compuestos inducían apoptosis y necrosis. BrB y BrC elevaron los rangos de p21 indicando una posible detención del ciclo celular G1. BrA (6 µM) y BrB (3,84 µM) redujeron la expresión de fosfo-AKT (serina/treonina quinasa AKT), lo que además influyó en el ciclo celular y la proliferación.

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BrA, BrB y BrC elevan la PARP (poli (ADP-ribosa) polimerasa) escindida, una proteína asociada a la restauración del ADN y a la inducción de procesos apoptóticos. Debido a este hecho, esta investigación decidió los valores IC50 de brachydins dentro de la línea celular PC-Three, además de los efectos sobre la proliferación celular y la pérdida de células de los procesos de vida, equivalente a la apoptosis y necrosis, lo que indica las proteínas que participan en estos procesos.


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