El receptor de desarrollo epidérmico (EGFR) es una proteína transmembrana de tipo I, miembro de la familia de receptores tirosina quinasa del receptor de desarrollo epidérmico humano (HER). El EGFR es un mediador vital del desarrollo y la diferenciación celular y forma homodímeros o heterodímeros con diferentes relaciones HER para activar cascadas de señalización descendentes.
Previamente establecimos un anticuerpo monoclonal (mAb) anti EGFR humano (hEGFR), clon EMab-134 (IgG1 de ratón), inmunizando ratones con el ectodominio del hEGFR. En esta investigación, la subclase de EMab-134 se transformó de IgG1 a IgG2a (134-mG2a) y se defucosiló adicionalmente (134-mG2a-f) para facilitar la citotoxicidad móvil dependiente de anticuerpos (ADCC).
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Aunque 134-mG2a-f se desarrolló contra hEGFR, se demostró que reaccionaba de forma cruzada con EGFR canino (dEGFR) utilizando citometría de movimiento. La citometría de movimiento determinó que la disociación fija (OkayD) de 134-mG2a-f hacia células CHO-K1 sobreexpresadas con dEGFR (CHO/dEGFR) era de 3,3 × 10-9 M, lo que indica que 134-mG2a-f posee una afinidad de unión excesiva con dEGFR.
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La evaluación in vitro reveló que 134-mG2a-f contribuyó a rangos excesivos de ADCC y citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) en experimentos centrados en células CHO/dEGFR. Además, la administración in vivo de 134-mG2a-f inhibió considerablemente el evento de CHO/dEGFR en comparación con los resultados observados en respuesta a IgG de ratón administrada. En conjunto, los resultados de esta investigación revelan que 134-mG2a-f posiblemente podría ser útil como parte de una rutina terapéutica para dEGFR-expresando cánceres caninos.
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Un anticuerpo monoclonal anti-HER2 H 2 Mab-41 ejerce acciones antitumorales en un maniquí de xenoinjerto de ratón que utiliza células caninas con sobreexpresión de HER2
La sobreexpresión del receptor epidérmico humano 2 (HER2) se ha descrito en una amplia gama de tipos de cáncer, como el de mama, pulmón, estómago, páncreas y colorrectal. Trastuzumab, un anticuerpo monoclonal humanizado anti-HER2 (mAb), ha demostrado proporcionar importantes ventajas de supervivencia en pacientes con cáncer de mama y cáncer gástrico con sobreexpresión de HER2.
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Anteriormente, en nuestro laboratorio se había desarrollado un mAb anti-HER2, H2Mab-41 (IgG2b, kappa), y se había demostrado su efecto antitumoral en modelos de xenoinjerto de ratón de cáncer de colon humano. La investigación actual tenía como objetivo investigar el poder de H2Mab-41 para inducir citotoxicidad móvil dependiente de anticuerpos (ADCC) y citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) en rastros celulares caninos sobreexpresados con HER2 (dHER2), y así ejercer su ejercicio antitumoral contra tumores sobreexpresados con dHER2 in vivo.
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Los resultados de la citometría de flujo demostraron la reactividad cruzada de H2Mab-41 con dHER2. Análisis adicionales de la interacción entre H2Mab-41 y células CHO-K1 sobreexpresadas con dHER2 (CHO/dHER2) indicaron una afinidad de unión media de H2Mab-41 hacia dHER2, con una disociación fija (OkayD) de dos,6 × 10-8 M.
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La evaluación in vitro reveló que la administración de H2Mab-41 inducía rangos excesivos de ADCC y CDC en células CHO/dHER2. Además, la administración intraperitoneal de H2Mab-41 en fashions de xenoinjerto de ratón de CHO/dHER2 produjo una inhibición importante del crecimiento tumoral en comparación con la IgG de ratón de administración.
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Así pues, los hallazgos de la presente investigación demostraron la seguridad y eficacia in vivo del H2Mab-41, destacando su idoneidad para ser incluido como parte de una rutina terapéutica para los cánceres caninos que expresan dHER2.
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| T7 DNA | |
| 310-005 | GeneOn |
| T7 DNA | |
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Transformación de un anticuerpo monoclonal CD4 anti-ratón en un agente de imagen de tomografía por emisión de positrones scFv para la monitorización longitudinal de células T CD4 +
La tomografía por emisión de positrones (PET), una modalidad de imagen no invasiva, puede presentar un método dinámico para la evaluación longitudinal de poblaciones celulares de interés. La transformación de mAbs en agentes de imagen PET basados en fragmentos variables de cadena única (scFv) permitiría la monitorización no invasiva in vivo de una variedad de dianas alcanzables.
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| LF-EK60047 | |||
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| EF019186 | |||
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Hemos utilizado el marcaje enzimático mediado por sortasa junto con la PEGilación para desarrollar un agente de imagen PET basado en scFv anti-CD4 de ratón construido a partir de un mAb anti-CD4 de ratón. Este scFv anti-CD4 puede monitorizar la distribución in vivo de células T CD4+ mediante inmuno-PET.
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| Protein G Protein | |||
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Rastreamos células T CD4+ y CD8+ en ratones de tipo salvaje, en receptores inmunodeficientes reconstituidos con poblaciones monoclonales de células T OT-II y OT-I, y en un maniquí de melanoma B16. La inmuno-PET anti-CD4 y -CD8 confirmó que la persistencia de cada una de las células T CD4+ y CD8+ transferidas a ratones inmunodeficientes mejoraba cuando los receptores habían sido inmunizados con OVA en CFA.
En los animales portadores de tumores, la infiltración de células T CD4+ y CD8+ aumentó a medida que crecía el tumor. El método descrito en esta investigación tiene que ser fácilmente relevante para transformar Abs clínicamente útil en los correspondientes scFv PET agentes de imagen.
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| Glentham Life Sciences | |||
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Elucidación estructural del polisacárido imparcial de Tsukamurella pulmonis y su visualización en tejidos de ratón contaminados mediante anticuerpos monoclonales particulares.
Tsukamurella pulmonis es un patógeno actinomicetal oportunista relacionado con una amplia gama de infecciones humanas apenas identificadas. En los casos médicos de infección, T. pulmonis suele acompañar a diferentes patógenos bacterianos. Debido a estas infecciones combinadas, es necesario un ensayo de diagnóstico robusto.
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Los polisacáridos del suelo celular del microorganismo se consideran no sólo objetivos útiles para el diagnóstico, sino también temas interesantes para la evaluación de las interacciones que regulan básicamente la respuesta del huésped. Aquí mismo, se estableció la construcción de la parte polisacárida de la pared celular de T. pulmonis.
La evaluación de azúcares y metilación y las estrategias 2D-NMR revelaron que su polisacárido pertenece a la categoría de arabinomanano compuesto por modelos de repetición de tetrasacáridos ramificados, con adición de →6)-α-D-Manp-(1→ manano lineal. Los sueros policlonales de conejo frente a las células bacterianas de T. pulmonis y T. paurometabola revelaron una reactividad cruzada entre sus antígenos.
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Las muestras de tejido de ratones contaminados con T. pulmonis revelaron abscesos hepáticos y gránulos patológicos situados intracelularmente cuando se tiñeron inmunohistoquímicamente con anticuerpos monoclonales elevados hacia el polisacárido de T. pulmonis. La investigación ultraestructural reveló que estos gránulos incluyen células de T. pulmonis. Estas observaciones apuntan a que T. pulmonis es una especie patógena capaz de propagarse por todo el organismo, presumiblemente a través de la sangre.
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Los anticuerpos monoclonales contra el antígeno carcinogénico embrionario “atrapan y lanzan” dan lugar a una mayor publicidad plasmática y tumoral en un modelo de ratón de cáncer colorrectal.
En esta investigación, se examinaron los resultados de la expresión del objetivo, la expresión del receptor Fc neonatal (FcRn) en los tumores, y la unión del objetivo dependiente del pH en la disposición de los anticuerpos monoclonales (mAbs) en fashions murinos de cáncer colorrectal. Se desarrolló un panel de mAbs contra el antígeno carcinoembrionario (CEA) mediante la experiencia normal con hibridomas, tras lo cual se evaluó la unión al CEA dependiente del pH. La unión se evaluó mediante inmunoensayos y ensayos de unión a radioligandos.
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Para las investigaciones farmacocinéticas se eligieron 10H6, un mAb IgG1 murino con una afinidad excesiva por la ACE a pH = 7,4 (KD = 12,6 ± 1,7 nM) y menor afinidad a pH = 6,0 (KD = 144,6 ± 21,8 nM), y T84.66, que muestra una unión a la ACE independiente del pH (KD = 1,1 ± 0,11 y 1,4 ± 0,16 nM a pH 7,4 y 6,0). Se evaluó la farmacocinética tras la administración intravenosa a ratones manejados y a ratones portadores de tumores con (MC38CEA+, LS174T) y sin (MC38CEA-) expresión de CEA y con o sin expresión de FcRn murino, a dosis de 0,1, 1 y 10 mg/kg.
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10H6 mostró una farmacocinética lineal en ratones portadores de tumores MC38CEA+ o MC38CEA-. T84.66 mostró una farmacocinética lineal en ratones con tumores MC38CEA-, sin embargo, una farmacocinética no lineal dependiente de la dosis en ratones portadores de MC38CEA+ Junto con el perfil farmacocinético plasmático mejorado (es decir, farmacocinética lineal, semivida terminal más larga), 10H6 mostró una publicidad mejorada en tumores MC38CEA+ en relación con T84.66.
En ratones portadores de tumores con expresión de CEA, pero sin expresión de FcRn murino (LS174T), 10H6 demostró una farmacocinética no lineal, con un aclaramiento rápido a dosis bajas. Estos conocimientos están en consonancia con la especulación de que la unión a CEA dependiente del pH permite la disociación del mAb de la diana en endosomas acidificados, permitiendo la seguridad mediada por FcRn de la eliminación mediada por la diana en ratones portadores de tumores MC38CEA+.
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