Un sensor de cortisol ultrasensible aptámero-anticuerpo en sándwich para la monitorización no invasiva del estado de estrés

El cortisol es un glucocorticoide importante que puede tener un efecto sobre las acciones fisiológicas dentro de la fisiología humana. Además, también es un biomarcador que puede reflejar el estado de estrés del organismo. Por consiguiente, con el fin de monitorizar los estados de estrés con un método delicado y no invasivo, se propuso un sensor sándwich aptámero-anticuerpo ultrasensible modificado con nanotubos de carbono multipared, carbono mesoporoso ordenado CMK-3 y nanopartículas de plata (MWCNTs/CMK-3/AgNPs) para la detección no invasiva de cortisol en saliva humana.

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El nanocompuesto MWCNTs/CMK-3/AgNPs se montó en el suelo de los electrodos de carbono vítreo (GCEs) como tejido para la esfera primaria de amplificación de señales, y la amplificación secundaria de señales se realizó conjugando anticuerpos de cortisol con nanopartículas de oro (AuNPs).

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Por último, se utilizó la muestra de sándwich aptámero-anticuerpo para reconocer y unir particularmente el cortisol. La variación de la respuesta de enfoque para este sensor sándwich aptámero-anticuerpo es de 0,1 pg/mL-10 ng/mL, y el límite de detección (LOD) es de 0,09 pg/mL.

Hasta ahora, el LOD de este sensor ha sido comparativamente bajo, lo que demuestra su buena sensibilidad, selectividad, estabilidad y reproducibilidad. Además, se ha utilizado de forma eficaz para detectar cortisol en muestras de saliva y determinar los estados de estrés de estudiantes universitarios y de posgrado.

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00002 Cusabio
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Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium
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Ensayo Colorimétrico Extremadamente Delicado de Cortisol Utilizando CortisolAnticuerpo y Ensayo Sándwich de Aptámeros


En este examen, el cortisol, que es una hormona clave del estrés, puede muy bien ser detectado sensiblemente por medio del ensayo colorimétrico de un sustrato de policarbonato (PC) y vidrio por el ensayo sándwich de anticuerpo monoclonal de cortisol (c-Mab) y aptámero de unión particular de cortisol (c-SBA).

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Un cambio extremadamente delicado en la colorimetría con un límite de detección (LOD) de cortisol de 100 fM puede muy bien ser alcanzado en el sustrato ópticamente claro utilizando el anticuerpo aptámero sándwich (AAS) ensayo por pilas correspondientes de 5 nm nanopartículas de oro (Au NPs).

Las Au NPs se conjugaron con el c-SBA y el c-Mab se fijó a los sustratos de PC y vidrio. Para la técnica AAS, se adoptó un espectrofotómetro UV-Vis fácil para cuantificar las concentraciones de cortisol a una longitud de onda de absorbancia de 520 nm. Posteriormente, este examen demuestra la flexibilidad de la técnica AAS para medir concentraciones muy bajas de cortisol en funciones de diagnóstico.

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El péptido prolactina (pPRL) induce anticuerpos anti-prolactina, ROS y cortisol, pero suprime las respuestas inmunes particulares en la trucha arco iris.


La prolactina tiene una serie de características inmunes en los peces, sin embargo, los resultados sobre las partes innatas y particulares de la inmunidad de la trucha arco iris son actualmente desconocidos. Posteriormente en este examen, prolactina péptido (pPRL) la inyección en la trucha arco iris generado anticuerpos anti-PRL que se han confirmado a través de ensayos Western blot de peces extracto de tejido de la mente.


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Al mismo tiempo, este grupo de peces fue inmunizado con un antígeno vírico (VP2) y posteriormente se determinó el título de anticuerpos específico generado por la trucha arco iris, así como la capacidad seroneutralizante de los anticuerpos.

Curiosamente, este grupo de peces (pPRL-VP2) generó aproximadamente un 150% mucho menos de anticuerpos en contraste con los peces inmunizados únicamente con el antígeno viral (VP2), y los peces pPRL-VP2 elevaron su grado de cortisol en cuatro ocasiones en comparación con la gestión.

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DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
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Por otra parte, a través de ensayo qPCR, decidimos que el grupo de peces pPRL-VP2 disminuyó la expresión de transcripción pro-inflamatoria, y el suero de los peces (pPRL-VP2) estimuló la fabricación de ROS en leucocitos de peces no tratados, un fenómeno que fue bloqueado por el inhibidor farmacológico del receptor de cortisol (RU486). En conjunto, que es el informe primario que significa que pPRL puede modular cada una de las partes de la inmunidad en la trucha arco iris.

Protein A protein
Fitzgerald
pLDH Protein Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

Detección Digital de Cortisol Utilizando un Polímero Incrustado en Anticuerpo Acoplado a un Transistor de Impacto en el Sujeto.

Se ha demostrado en situaciones fisiológicas un sensor de cortisol basado en un transistor de efecto de campo. Se propuso un polímero incrustado de anticuerpo en la puerta distante para vencer la situación del tamaño de Debye (λD). La membrana de detección se hizo mediante la vinculación de poli (estireno-ácido co-methacrylic) (PSMA) con anticortisol antes de recubrir el polímero modificado en la puerta distante.

An ultrasensitive aptamer-antibody sandwich cortisol sensor for the noninvasive monitoring of stress state
Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
Magtivio
MagSi-WAX
Magtivio

El receptor integrado en el polímero confirmó una sensibilidad de 10 fg/mL a 10 ng/mL para el cortisol y un límite de detección (LOD) de 1 pg/mL en 1× PBS, donde λD es de 0,2 nm. Se comprobó un LOD de 1 ng/mL en sudor sintético amortiguado con calma. Por último, un ELISA en sándwich confirmó el ejercicio de unión a anticuerpos de PSMA incrustado en anticuerpos.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
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Bioingentech
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Acoplamiento directo vs mediado de anticuerpos a nanopartículas de oro: El Caso de la Detección de Cortisol Salival por Inmunoensayo de Movimiento Lateral.


Se buscan conjugados estables y respetuosos con el medio ambiente entre anticuerpos y nanopartículas de oro (GNP-Ab) para desarrollar biosensores extremadamente delicados y resistentes con funciones en medicación, toxicología, controles de seguridad alimentaria y suministro de fármacos específicos.

Se han propuesto varios métodos para guiar la unión del anticuerpo a las GNP preservando así el ejercicio del anticuerpo, junto con el acoplamiento covalente del anticuerpo a un polímero injertado en el suelo de la GNP y la explotación de la afinidad excesiva de los biorreceptores como mediadores para la unión.

Cada enfoque permite además blindar las GNP con una capa protectora que garantice la robustez del conjugado. Sin embargo, los anticuerpos se adsorben libremente a las GNP con una eficacia de unión excesiva. La adsorción no específica es mucho más fácil, rápida y barata que cualquier acoplamiento mediado.

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Por lo tanto, es muy popular para muchas funciones, aunque se cree que proporciona GNP-Ab con un ejercicio restringido. En este trabajo, en contraste tres métodos para la producción de GNP-Ab,
comparables a
(i) acoplamiento covalente mediado por una capa química,
(ii) unión basada en la afinidad mediada por una capa biomolecular compuesta de proteína estafilocócica A, y
(iii) unión directa por adsorción.

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Las GNP-Ab así preparadas se han empleado como sondas en un inmunoensayo colorimétrico de movimiento lateral (LFIA) para medir el cortisol salival como un biosensor maniquí que depende del uso de conjugados GNP-Ab energéticos. Inesperadamente, los biosensores fabricados utilizando las tres sondas han sido totalmente comparables por medio de su capacidad para medir el cortisol salival.

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Además, nos dimos cuenta de que la sensibilidad de la LFIA dependía principalmente de la cantidad del anticuerpo cierto a GNPs ligeramente que en la estrategia por la que era cierto. Las sondas preparadas utilizando tanto la estrategia de adsorción directa como el acoplamiento mediado por el mediador bioquímico permitieron el desarrollo de dispositivos de punto de atención para la medición rápida, delicada y fiable del cortisol salival humano.

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Una “cría” de un solo paso generó un fragmento de anticuerpo anticortisol de diagnóstico con una afinidad 30 veces mayor.


Los rangos de cortisol en los fluidos corporales simbolizan un índice útil para el rendimiento pituitario-adrenal, y por lo tanto se requieren anticuerpos anti-cortisol sensibles. En la actualidad, hemos estudiado los métodos de “cría de anticuerpos”, que incluyen la evolución in vitro de anticuerpos para mejorar sus prestaciones de unión a antígenos.

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En este caso, hemos producido un fragmento de anticuerpo para medir los niveles de cortisol sérico con una afinidad 30 veces mayor tras una única mutagénesis y pasos de elección. Se eligió como anticuerpo prototipo un anticuerpo anticortisol de ratón, Ab-CS#3, con una afinidad inadecuada para un uso razonable.

Se preparó un fragmento Fv de cadena simple “de tipo salvaje” (wt-scFv; Ka, 3,4×108 M-1) mediante la expresión bacteriana de un gen de fusión que combinaba los genes VH y VL de este anticuerpo. A continuación, se han generado individualmente mutaciones de nivel aleatorio en VH o VL mediante PCR propensa a errores, y la mercancía resultante se ha utilizado para ensamblar genes scFv, que se han desplegado en fagos filamentosos.

El barrido repetido de la biblioteca de fagos reconoció un scFv mutante (scFv#m1-L10) con una afinidad 30 veces mayor (Ka 1,2×1010 M-1). Tres sustituciones de aminoácidos (Cys49Ser, Leu54Profesional, y Ser63Gly) se han notado en su secuencia VL.


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En un ensayo inmunoenzimático (ELISA) agresivo, el scFv mutante generó curvas dosis-respuesta con una variación de medición de aproximadamente 0,03-0,6 ng/ensayo de cortisol, cuyo punto medio (0,15 ng/ensayo) fue 7,3 veces menor que el del wt-scFv.

Aunque la cortisona, el 11-deoxicortisol y la prednisolona confirmaron una reactividad cruzada apreciable, el scFv mutante debería permitir ensayos rutinarios delicados de cortisol, aparte de la medición tras administraciones de metirapona o dosis altas de prednisolona. En realidad, los rangos de cortisol de los sueros de gestión obtenidos con el ELISA basado en scFv han estado dentro de la gama de referencia.


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