Estratificación por pulverización de inmunoglobulina G humana: optimización de la formulación y de los parámetros del proceso

La estratificación por pulverización es una forma de utilizar fármacos o polímeros útiles en perlas de servicio; además, puede utilizarse en lugar de la técnica para el secado de proteínas y para estratificar proteínas en un sistema de suministro multiparticulado. En esta investigación, se han estudiado las consecuencias de las variables de formulación y el curso de los parámetros sobre las propiedades de la inmunoglobulina G humana (IgG) a lo largo de la estratificación por pulverización.

Se han estudiado los resultados de excipientes como la polivinilpirrolidona (PVP), la trehalosa, la sacarosa y el monoclorhidrato de L-arginina en la mejora de la estabilidad de la IgG durante la pulverización por capas. Curso de parámetros, junto con el precio de alimentación de respuesta de proteínas, la temperatura del aire de entrada, el precio del movimiento del aire de entrada, y la tensión de atomización de la respuesta de pulverización se han estudiado utilizando 24 diseño factorial completo con tres factores medios replicados.


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EnoGene
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La inclusión de PVP en la formulación disminuyó considerablemente la turbidez de la respuesta de reconstitución y elevó la restauración de IgG. La inclusión de trehalosa, sacarosa o arginina mejoró aún más el restablecimiento de la proteína tras la reconstitución y redujo el porcentaje de agregación de IgG.

Los resultados del Diseño de Experimentos (DOE) no confirmaron resultados vitales de los 4 elementos en el rendimiento del método y la restauración de la proteína IgG dentro de la variedad de parámetros estudiados. Todos los elementos primarios además de la tensión de atomización tuvieron resultados vitales en la proporción de monómero, entre los cuales el movimiento del aire representó probablemente el efecto más vital.

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Asimismo, la temperatura del aire de entrada tuvo resultados vitales en el ejercicio de unión in vitro de IgG tras la estratificación por pulverización. Mediante la optimización de la formulación, hemos estado en condiciones de obtener probablemente la mayor cantidad de IgG pulverizada por capas y reducir la agregación de IgG a lo largo del proceso. La investigación DOE dio la percepción de cómo el curso de las variables tienen un efecto sobre la mercancía de pulverización por capas.

Era y caracterización útil de Porphyromonas gingivalis W83 FimA recombinante
Se cree que Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) es un patógeno clave en las enfermedades periodontales perjudiciales. Expresa bastantes elementos de virulencia, entre ellos las fimbrias, que pueden intervenir en la colonización, invasión, instauración y persistencia del microorganismo en las células del huésped.

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Además, se ha demostrado que las fimbrias influyen en los mecanismos de respuesta inmunitaria del hospedador. Las fimbrias clave están en condiciones de unirse particularmente a células huésped totalmente diferentes, entre ellas los monocitos de sangre periférica.

La interacción de esas células con las fimbrias induce el lanzamiento de citocinas similares a la interleucina-1 (IL-1), la IL-6 y el factor de necrosis tumoral-α (TNF-α). La intención de esta investigación era generar proteína FimA principal recombinante a partir de fimbrias de P. gingivalis W83 y mostrar su ejercicio orgánico.

T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-25g Abbexa
T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-5g Abbexa
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio
T7 DNA
310-005 GeneOn
T7 DNA
310-025 GeneOn

FimA de P. gingivalis W83 se amplificó a partir de ADN cromosómico, se clonó en un vector y se transfirió a Listeria innocua. (La proteína expresada se recogió y purificó mediante FPLC con una columna His entice HP. La identificación y la pureza se demostraron mediante electroforesis en gel y espectrometría de masas.

El ejercicio orgánico se evaluó mediante la estimulación de células epiteliales orales humanas y monocitos de sangre periférica con la proteína y, posteriormente, se cuantificaron las citocinas presentes en los sobrenadantes mediante un ensayo inmunoenzimático (ELISA) y una matriz citométrica de microesferas.

Protein A Protein
Abbexa
Protein A Protein
Abbexa
Protein A protein
Fitzgerald

La FimA recombinante puede generarse y purificarse de forma eficaz. La electroforesis en gel y la espectrometría de masas confirmaron que las secuencias detectadas son idénticas a FimA. La estimulación de monocitos humanos indujo la descarga de concentraciones excesivas de IL-1β, IL-6, IL-10 y TNF-α por parte de estas células.

En conclusión, se estableció una proteína FimA recombinante y se confirmó su ejercicio orgánico. Esta proteína podría funcionar como un agente prometedor para la investigación adicional de su función en la periodontitis y posibles nuevos enfoques terapéuticos.

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Glentham Life Sciences
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Caracterización de alginato extraído de Sargassum latifolium y su uso en la promoción del progreso de Chlorella vulgaris y el suministro de fármaco riboflavina


Los alginatos derivados de macroalgas se han utilizado ampliamente en un gran número de aplicaciones debido a su estabilidad, biodegradabilidad y biocompatibilidad. El alginato se extrajo del talo egipcio de Sargassum latifolium, con un rendimiento del 17,5% en peso.

La composición química de S. latifolium es rica en azúcares enteros (41,08%) y ácidos urónicos (47,4%); mientras que los contenidos en proteínas, lípidos y sulfatos son de 4,61, 1,13 y 0,09%, respectivamente. Además, se han realizado análisis de RMN, FTIR y TGA.

El índice de cristalinidad (0,334) indica la naturaleza semicristalina del alginato. El hidrolizado de alginato de sodio se evaluó como promotor del progreso de Chlorella vulgaris. La mejor estimulación (0,7 g / L de biomasa) se logró mediante la utilización de 0,3 g / L de hidrolizado de alginato de suplementación.

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PCR Mix
Biochain
PCR-EZ D-PCR MASTER MIX
Bio Basic
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Las mejores proteínas solubles enteras y carbohidratos enteros han sido 179,22 mg / g de peso seco y 620,33 mg / g de peso seco, respectivamente. El mejor contenido de fenoles (27,697 mg/g de peso seco) y el mejor ejercicio de guayacol peroxidasa (2,899 µmol min-1 g-1) se registraron junto con 0,3 g/l de alginato hidrolizado.


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Tres g / L de hidrolizado de alginato de suplementación. Se formuló una matriz polimérica (perlas) de alginato de bario y goma arábiga atrapada con riboflavina para alcanzar una eficacia óptima de atrapamiento del fármaco (EE%) del 89,15%. Todas las formulaciones exhibieron un lanzamiento prolongado de riboflavina durante 120 min en líquido gástrico simulado, adoptando el maniquí de Higuchi (R2 = 0,962-0,887) y el maniquí de Korsmeyer-Peppas con lanzamiento Fickian (n oscila entre 0,204 y 0,3885).

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Inmovilización sitio-específica catalizada por tirosinasa de C-ficocianina de ingeniería al suelo.


La reticulación enzimática de proteínas suele estar restringida por la disponibilidad estérica de los residuos objetivo, como en el caso de la tirosinasa. Con una etiqueta peptídica N-terminal que contiene dos residuos de tirosina, la proteína fluorescente C-ficocianina HisCPC de Synechocystis sp.

Spray Layering of Human Immunoglobulin G: Optimization of Formulation and Process Parameters

PCC6803 se reticuló a variedades fluorescentes de alto peso molecular con tirosinasa. La reticulación con tirosinasa en presencia de L-tirosina produjo mercancías no fluorescentes de alto peso molecular.

Incubado en presencia de tirosinasa, el HisCPC también se inmoviliza en perlas de poliestireno modificadas con aminoácidos, lo que le confiere una fluorescencia azul. La reticulación y la inmovilización han sido sitio-específicas ya que cada proceso requiere la presencia del péptido N-terminal en HisCPC.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
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Goat Cholesterol ELISA ELISA
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Perfiles y Validación de la Metilación de Proteínas en Células Moradoras con Enzimas de Ingeniería y Análogos de Metionina


Las metiltransferasas de proteínas (PMT) regulan muchas facetas de los procesos regulares y patológicos mediante la metilación de sustratos, con la S-adenosil-L-metionina (SAM) como cofactor. Ha sido difícil dilucidar la metilación de lisina y arginina en proteínas móviles debido a que estas modificaciones apenas alteran las propiedades corporales de las proteínas objetivo y a veces son dependientes del contexto, transitorias y subestequiométricas.

Stepped Micro Tip (includes Interface Washers)
0-120-0005 Biologics
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0-120-0007 Biologics
Tapered Micro Tips 5 mm Diameter Tapered Titanium Micro Tip
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13 mm Diameter Tapped Titanium Tip
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Para revelar de buena fe metilación ocasiones relacionadas con las acciones particulares PMT en contextos nativos, hemos desarrollado la célula viva Bioorthogonal Perfiles de metilación de proteínas (lcBPPM) know-how, durante el cual los sustratos de PMTs particulares están etiquetados por PMTs ingeniería dentro de las células residentes, con in situ-sintetizado análogos de SAM como cofactores.

La biorthogonality de este know-how se logra como resultado de estos cofactores SAM análogo sólo puede ser procesada por la ingeniería PMTs-y no nativos PMTs para modificar los sustratos con equipos químicos distintos. Aquí describimos el protocolo lcBPPM más reciente y su utilidad para revelar la metilación en todo el proteoma y validar ocasiones particulares de metilación.

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Primary Protocol 1: Live-cell labeling of substrates of protein methyltransferases GLP1 and PRMT1 with lcBPPM-feasible enzymes and SAM analogue precursors

Help Protocol: Gram-scale synthesis of Hey-Met

Primary Protocol 2: Click on labeling of lcBPPM cell lysates with a biotin-azide probe

Alternate Protocol: Click on labeling of small-scale lcBPPM cell lysates with a TAMRA-azide dye for in-gel fluorescence visualization

Primary Protocol 3: Enrichment of biotinylated lcBPPM proteome with streptavidin beads

Primary Protocol 4: Proteome-wide identification of lcBPPM targets with mass spectrometry

Primary Protocol 5: Validation of particular person lcBPPM targets by western blot.

Fuentes :

  1. Gentaur
  2. NCBI
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