Influencia de la composición del medio basal en la fidelidad de la barrera en modelos de barrera hematoencefálica derivados de células madre pluripotentes humanas

Cada vez se reconoce más que las células endoteliales microvasculares de la mente (BMEC), la parte principal de la barrera hematoencefálica (BBB), son extremadamente delicadas a las señales solubles de la corriente sanguínea y de la mente. Esta idea se extiende in vitro, donde el medio extracelular puede afectar a las propiedades de la BBB en las células tradicionales.

Sin embargo, no está claro hasta qué punto las circunstancias básicas de la tradición pueden tener un efecto sobre las propiedades de la BBB in vitro, lo que tiene implicaciones para la variabilidad y reproducibilidad del modelo, además de las evaluaciones posteriores del transporte molecular y los fenotipos de la enfermedad.

Stepped Micro Tip (includes Interface Washers)
Biologics
Tapered Micro Tips
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Tapered Micro Tips 5 mm Diameter Tapered Titanium Micro Tip
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Biologics

Aquí, descubrimos esta idea mediante el análisis de las propiedades de la BBB dentro de las células humanas derivadas de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) BMEC-como células traditiond bajo circunstancias libres de suero en DMEM / F12 y los medios de comunicación Neurobasal, que han descrito absolutamente composiciones.

Revelamos variaciones notables en cada una de las propiedades pasivas y vivas de la BBB como una operación de la composición del medio basal. Además, la secuenciación del ARN y los análisis del fosfoproteoma revelaron alteraciones en numerosas vías de señalización en respuesta a las variaciones del medio basal.

En general, nuestros resultados revelan que las circunstancias de la tradición de base pueden tener un profundo efecto en la eficiencia de las fórmulas de la BBB in vitro, y estos resultados deben ser considerados cuando se diseñan experimentos que hacen la mayor parte de tales fórmulas para el análisis fundamental y los ensayos preclínicos.

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Especiación de nanopartículas de platino en numerosos medios de tradición celular mediante HPLC-ICP-TQ-MS y métodos complementarios: Una contribución a los ensayos toxicológicos


La investigación toxicológica de las nanopartículas (NPs) es extremadamente demandada hoy en día, sin embargo es muy difícil. Dentro de los ensayos in vitro, la comprensión de la posición de los medios de la tradición celular es esencial para derivar una interpretación correcta de los resultados toxicológicos y para tomar medidas, se necesitan nuevos instrumentos analíticos.

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Tapered Micro Tips 5 mm Diameter Tapered Titanium Micro Tip
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En este contexto, se ha desarrollado por primera vez una técnica analítica basada principalmente en la cromatografía líquida de fase inversa unida a la espectrometría de masas de triple cuadrupolo con plasma acoplado inductivamente (HPLC-ICP-TQ-MS) para la detección y caracterización de las PtNP de 5 y 30 nm, además de las especies iónicas de platino, en medios de tradición celular generalmente utilizados.

Para esta función, se han examinado el Medio Eagle Modificado de Dulbecco, DMEM-alta glucosa, DMEM-F12, DMEM 31053-028, y Roswell Park Memorial Institute, RPMI-1640 (suplementado con 10% de suero fetal bovino (FBS) y antibióticos) en varias ocasiones de incubación (24, 48 y 96 h a 37 °C).

Tras una cuidadosa optimización y eficacia analítica, la técnica desarrollada permite examinar simultáneamente el curso de oxidación, que da lugar a la descarga de especies iónicas, y el aumento de la cantidad hidrodinámica de PtNPs, muy probablemente asociado a la formación de entidades orgánicas recientes (corona de proteínas).

Rat Cholesterol ELISA ELISA
E01A11128 BlueGene
Goat Cholesterol ELISA ELISA
E01A46041 BlueGene

Se descubrió que la magnitud de cada proceso dependía de los medios de la tradición celular examinada y de las ocasiones de incubación. La dispersión dinámica de la luz (DLS) y la microscopía electrónica de barrido de alta resolución (HR-SEM) se han utilizado como métodos complementarios para revisar la técnica vital de cada formación de la corona de proteínas suave y ardua.

La viabilidad de la HPLC-ICP-TQ-MS para obtener información relacionada con la investigación toxicológica se ha demostrado y en la luz de nuestros resultados, el efecto de los medios de la tradición celular en los hábitos de PtNPs no debe ser subestimado.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
E01A11128 BlueGene
Goat Cholesterol ELISA ELISA
E01A46041 BlueGene
Sheep Cholesterol ELISA ELISA
E01A98335 BlueGene
Mouse Cholesterol ELISA ELISA
E01A19869 BlueGene
Human Cholesterol ELISA ELISA
E01A2368 BlueGene

Medición de la carga de consumo de oxígeno (OCR) y de la carga de acidificación extracelular (ECAR) en células de tradición para evaluar el metabolismo de la vitalidad


Las células de mamíferos generan ATP mediante el metabolismo mitocondrial (fosforilación oxidativa) y no mitocondrial (glucólisis). La mayoría de las células cancerosas se identifican para reprogramar su metabolismo utilizando métodos totalmente diferentes para satisfacer las necesidades energéticas y anabólicas.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
PCR Mix
Biochain
PCR-EZ D-PCR MASTER MIX
Bio Basic
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
Influence of basal media composition on barrier fidelity within human pluripotent stem cell-derived blood-brain barrier models

Además, cada tejido canceroso tiene sus propias opciones metabólicas. Las mitocondrias no sólo juegan un papel clave en el metabolismo de la vitalidad, sino también en la regulación del ciclo celular.
Por lo tanto, las mitocondrias han surgido como un posible objetivo para el remedio contra el cáncer, ya que son estructuralmente y funcionalmente totalmente diferentes de sus homólogos no cancerosos.

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences

Hemos elaborado un protocolo para la medición de la tasa de consumo de oxígeno (OCR) y la tasa de acidificación extracelular (ECAR) en las células residentes, utilizando el Analizador de Flujo Extracelular Seahorse XF24 (Determinación 1). El analizador de flujo extracelular Seahorse XF24 mide repetidamente el foco de oxígeno y el flujo de protones dentro del sobrenadante celular a lo largo del tiempo.

Estas mediciones se transforman en valores OCR y ECAR y permiten una cuantificación directa de la respiración mitocondrial y la glucólisis. Con este protocolo, buscamos evaluar el funcionamiento mitocondrial basal y el estrés mitocondrial de tres cepas celulares de cáncer totalmente diferentes en respuesta al compuesto citotóxico de control mensacarcin con vistas a examinar su mecanismo de movimiento.

Protein A Protein
Abbexa
Protein A Protein
Abbexa
Protein A protein
Fitzgerald

Las células se han chapado en placas de tradición celular XF24 y se han mantenido durante 24 h. Antes de la evaluación, el medio de tradición se cambió con DMEM sin amortiguar de pH 7,4 y las células se han dejado equilibrar en una incubadora sin CO2 inmediatamente antes de la evaluación del flujo metabólico utilizando el Seahorse XF para permitir mediciones exactas de los ajustes de la unidad Milli-pH.

OCR y ECAR se han medido por debajo de las circunstancias basales y después de la inyección de compuestos por los puertos de inyección de drogas. Con el protocolo descrito evaluamos los perfiles esenciales del metabolismo de la vitalidad de las tres cepas celulares además de los parámetros clave del funcionamiento mitocondrial en respuesta a nuestro compuesto de comprobación y mediante la adición secuencial de agentes perturbadores de las mitocondrias oligomicina, FCCP y rotenona/antimicina A. Determinación 1.Visión general del experimento Seahorse.

T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-25g Abbexa
T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-5g Abbexa
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio
T7 DNA
310-005 GeneOn
T7 DNA
310-025 GeneOn


Resultados citotóxicos y antiinflamatorios del quitosano y la gelatina hemostática en la tradición celular oral


El quitosano es un biopolímero con impacto bactericida/bacteriostático, biocompatible y biodegradable. Se ha utilizado en la ingeniería tisular para intercambiar tejidos parcial o totalmente liberando suministros bioactivos o influyendo en el desarrollo celular, a menudo en la medicina regenerativa y la odontología.

El objetivo de este estudio era evaluar el impacto citotóxico y antiinflamatorio del quitosano solo o con gelatina hemostática (Spongostand®) en cultivos de células pulpares humanas (HPC), fibroblastos gingivales humanos (HGF) y preosteoblastos de ratón (MC3T3-E1, ATCC).

Las HPC y los HGF se obtuvieron a partir de pacientes. Las células se han subcultivado en DMEM. Se inoculó quitosano en concentraciones totalmente diferentes (0-0,5%) y se colocaron gelatinas hemostáticas impregnadas de quitosano (0,19%) en presencia de las células y se incubaron durante 24 horas.

La viabilidad de las células se decidió mediante la técnica MTT y se calculó el foco citotóxico implícito (CC50) a partir de la curva dosis-respuesta. El impacto antiinflamatorio se calculó a partir del maniquí de gingivitis in vitro inducido con interleucina 1beta (IL-1β) en HGF y la detección de proteínas.

Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
E22-HC180.48
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
E22-HC180.96

La información se ha sometido a los exámenes de Shapiro-Wilk, Kruskal-Wallis y Mann-Whitney. Los experimentos se han realizado por triplicado de tres ensayos imparciales. La viabilidad celular de las HPC, HGF y MC3T3-E1 implicadas en el quitosano disminuyó considerablemente (p<0,05).

Las HPC han sido probablemente las más delicadas (CC50= 0,18%), adoptadas por el HGF (CC50= 0,18%) y el MC3T3-E1 (CC50= 0,19%). La citotoxicidad de las gelatinas impregnadas de quitosano disminuyó la viabilidad celular de HGF y HPC en un 11% y un 5%, respectivamente. El impacto proinflamatorio disminuyó considerablemente en el maniquí de la gingivitis.

Para concluir, el quitosano induce resultados citotóxicos razonables solo o con gelatina hemostática al 0,19%, en método dependiente de la dosis, con resultados antiinflamatorios en fibroblastos gingivales humanos. El uso del quitosano como biomaterial podría ser una alternativa maravillosa para ser utilizada en la odontología regenerativa

Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
Abfrontier
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
EnoGene
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
EnoGene

Fuentes

  1. Gentaur
  2. NCBI

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