Ensayos para la determinación del contenido celular y mitocondrial de NAD + y NADH

El NAD+ es un cofactor redox importante para el correcto funcionamiento de una amplia gama de vías metabólicas esenciales, junto con los pasos clave del metabolismo vital mitocondrial. Además, sirve como sustrato de señalización para enzimas como las sirtuinas y la familia de enzimas poli-ADP ribosil-polimerasa.

Sirtuins, que son deacylases de proteínas dependientes de NAD +, aprovechar las modificaciones en las concentraciones móviles de NAD + para proporcionar las modificaciones en la posición de acilación de proteínas, lo que afecta a las características de aguas abajo junto con el metabolismo de la vitalidad, la resistencia al estrés, y la supervivencia celular.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
Biotium

Así, el suministro de NAD+ en las células, o en orgánulos particulares como la mitocondria, regula la señalización posterior y los procesos orgánicos clave. Esta idea ha impulsado la necesidad de que los investigadores midan de forma sencilla y exacta las concentraciones de NAD+ en muestras orgánicas.

A continuación describimos una serie de protocolos para la medición de las concentraciones de NAD+ y NADH en tejidos, células o compartimentos subcelulares que recuerdan a las mitocondrias. Estos protocolos incorporan un ensayo en bicicleta que puede medir en breve los rangos de NAD+ o NADH utilizando un lector de placas equipado con capacidades de medición de fluorescencia.

Este ensayo en placa depende únicamente de suministros comerciales junto con las muestras orgánicas de interés. Además, describimos un protocolo que utiliza NAD+ marcado con isótopos estables como costumbre interna para averiguar el contenido de NAD+ orgánico mediante estrategias de dilución de isótopos. Esta técnica requiere la espectrometría de masas para relacionar el NAD+ endógeno con el NAD+ exógeno marcado con isótopos para adquirir la cuantificación utilizando HPLC y espectrometría de masas.

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000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Un nuevo ensayo de detección colorimétrica controlado por luz para la nitrorreductasa basado principalmente en la síntesis de nanopartículas de plata catalizada por p-aminofenol y mediada por NADH
Se ha construido un nuevo ensayo colorimétrico controlado por luz y respetuoso con el medio ambiente para la cuantificación y detección de la nitrorreductasa (NTR), basado principalmente en la tecnología de AgNPs catalizada por p-aminofenol (pAP) y mediada por nicotinamida adenina dinucleótido (NADH).

Debido a la hidrólisis del p-nitrofenol por NTR en presencia de NADH, el producto de la hidrólisis puede ser utilizado como catalizador para catalizar el descuento de Ag+ por NADH bajo la luz solar. Debido a que el foco de NTR aumentará, el valor de la absorbancia a ca. 400 nm (A400) disminuye y el color de la respuesta pasa de marrón a amarillo vivo.

Se obtuvo una correlación lineal entre A400 y el foco de NTR dentro de la gama de 1-50 μg mL-1 y el límite de detección (LOD) es de 0,27 μg mL-1.
El sistema de detección no responde a diferentes moléculas orgánicas generalizadas debido a la especificidad de las enzimas y se examinó además el impacto del inhibidor de la nitrorreductasa en el ejercicio de NTR.
Por último, utilizamos el ensayo para averiguar la NTR en muestras de suero humano, añadiendo concentraciones totalmente diferentes de NTR con una restauración del 85,2%-92,5%.

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000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Identificación de las proteínas capaces de provocar el descuento metálico en el proteoma de la bacteria Gram-positiva Desulfotomaculum reducens MI-1 utilizando un ensayo de ejercicio basado en NADH.
La comprensión del descuento metálico microbiano se basa casi exclusivamente en la investigación de los organismos Gram-negativos. En esta investigación, nos ocupamos de Desulfotomaculum reducens MI-1, un reductor metálico Gram-positivo cuyo genoma carece de genes con similitud a cualquier reductasa metálica caracterizada.

Utilizando separaciones no desnaturalizantes e identificación por espectrometría de masas, junto con una pantalla de visualización colorimétrica para el descuento de Fe(III)-NTA quelado con NADH como donante de electrones, hemos reconocido proteínas del proteoma de D. reducens no caracterizadas previamente como reductasas de hierro.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier

Su funcionamiento fue confirmado por la expresión heteróloga en Escherichia coli. Además, presentamos que estas proteínas tienen la capacidad de reducir el Cr(VI) y el U(VI) solubles con NADH como donante de electrones. Las proteínas reconocidas son la NADH : flavina oxidorreductasa (Dred_2421) y un complejo proteico compuesto por la subunidad de unión de la flavin adenina dinucleótido/NAD(P) de la oxidorreductasa (Parafina) y la dihidroorotato deshidrogenasa 1B (Dred_1686).

Dred_2421 fue reconocido dentro del proteoma soluble y se predice que es una proteína citoplásmica. Dred_1685 y Dred_1686 se reconocieron tanto en la fracción proteica soluble como en la insoluble, lo que sugiere una especie de afiliación a la membrana, aunque PSORTb predice que ambas proteínas son citoplásmicas. Esta investigación es la primera evaluación proteómica intencionada de D. reducens y uno de los primeros análisis de descuento de metales y radionúclidos en una bacteria Gram positiva relacionada con el medio ambiente.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier
Chicken thrombomodulin,TM ELISA KIT ELISA
QY-E80092 Qayee Biotechnology
Oxycodone ELISA
EK7130 BosterBio
Amphiphysin ELISA
LF-EK0189 Abfrontier
Assays for Determination of Cellular and Mitochondrial NAD + and NADH Content

Acumulación de poli-3-hidroxibutirato impulsada por el NADH en Escherichia coli: Conocimiento a partir de ensayos enzimáticos y cultivos estables limitados en oxígeno
La biosíntesis de poli-3-hidroxibutirato (PHB) como producto de fermentación permite el acoplamiento de la tecnología del progreso y del producto. Además, la reducción del suministro de oxígeno debería reducir el valor operativo y mejorar el rendimiento del producto.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
ranavirus PCR kit
Bioingentech

La era del PHB como producto de fermentación se basa en el ejercicio in vivo de una acetoacetil-CoA reductasa que prefiere el NADH.
La prueba de esta idea requiere
(i) la cuantificación del deseo del cofactor, en circunstancias fisiológicamente relacionadas, de una putativa acetoacetil-CoA reductasa que prefiera el NADH y
(ii) la verificación de la acumulación de PHB utilizando una acetoacetil-CoA reductasa que prefiere el NADH en una especie naturalmente incapaz de hacerlo, por ejemplo, Escherichia coli.

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
Magtivio
MagSi-WAX
Magtivio

Este conjunto de datos comprende el conocimiento cinético obtenido por espectrofotometría y el conocimiento de una tradición constante de una presión de E. coli diseñada que acumula PHB bajo circunstancias de limitación de oxígeno.
En este conjunto de datos es posible buscar
(1) ensayos de estabilidad de la enzima;
(2) cargas preliminares y curvas de progreso de las reacciones catalizadas por dos acetoacetil-CoA reductasas;
(3) estimaciones del uso relativo de NADH y NADPH por dos acetoacetil-CoA reductasas;
(4) estimaciones de la capacidad de flujo de la respuesta catalizada por una acetoacetil-CoA reductasa;
(5) composición de la biomasa de una presión de E. coli modificada con un plásmido;
(6) cálculo de las cargas particulares reconciliadas de esta presión de ingeniería que se eleva sobre la sacarosa como el único suministro de carbono real bajo la limitación de oxígeno y
(7) las distribuciones de flujos metabólicos a lo largo del progreso constante de esta presión de ingeniería.

Protein A protein
Fitzgerald
pLDH Protein Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

Como resultado de una variedad comparativamente pequeña de acetoacetil-CoA reductasas se han caracterizado cinéticamente, el conocimiento y las secuencias de comandos aquí ofrecido puede muy bien ser útil para caracterizaciones cinéticas adicionales.

Además, el proceso descrito para estimar la composición de la biomasa puede ser fascinante para estimar la carga de plásmidos y proteínas en diferentes cepas. El software de reconciliación de conocimientos con las fermentaciones debería ayudar a adquirir cargas particulares en el paso con el precepto de la conservación de la masa y los electrones.

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

Todos los conocimientos y scripts necesarios para llevar a cabo estos análisis están depositados en un repositorio de conocimientos de Mendeley. Este texto fue co-sometido con el manuscrito titulado “Un NADH prefiriendo acetoacetil-CoA reductasa se dedica a la acumulación de poli-3-hidroxibutirato en Escherichiasia. coli”.

La siguiente sensibilidad y eficacia del ensayo PCR multiplex con cebador generalizado en la identificación del origen de la carne utilizando el gen de la subunidad Cuatro de la NADH deshidrogenasa.
Se desarrolló un cebador generalizado Multiplex PCR (CP-M-PCR) para detectar el origen de la carne de 4 equipos de animales (cerdo, rumiante, ave y conejo). Esta técnica demostró una mayor sensibilidad y eficacia que la PCR multiplex tradicional.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1
Frit Kit
FRIT-KIT
Column Packing Kit
PACK-KIT

En este método, se diseñó un cebador estándar en el extremo 5′ de un área homóloga de la subunidad 4 de la NADH deshidrogenasa mitocondrial (Nad 4) de todos los equipos de animales. Los cebadores inversos adaptadores particulares se diseñaron incluyendo una secuencia adaptadora en el extremo 5′.

Se utilizó la misma secuencia adaptadora que el cebador inverso adaptador generalizado. Los cebadores generaron fragmentos particulares de 267, 370, 504 y 548 pb de longitud para las carnes de cerdo, rumiante, ave y conejo, respectivamente. El uso de la secuencia adaptadora en el extremo 5′ de los cebadores inversos adaptadores generalizados elevó la eficacia de la amplificación y la aplicación de un cebador estándar anterior resolvió la complejidad en el sistema de PCR multiplex.

Las bandas de amplificación particular se detectan en los ensayos de PCR que contienen tan solo 10(-6) μM de cebador inverso adaptador. Este resultado final indicó que la sensibilidad era tremendamente elevada en comparación con la PCR multiplex tradicional (10(-3) μM).

El límite de detección de la CP-M-PCR de las muestras de ADN fue de 0,1 ng para los 4 equipos de carnes. La CP-M-PCR ha mejorado enormemente la sensibilidad y la eficacia del sistema de PCR para obtener un resultado final más fiable y correcto que el típico sistema de PCR multiplex.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
Alpha Diagnostics
Frit Kit
Next Advance
Column Packing Kit
Next Advance

Fuentes

  1. Gentaur
  2. NCBI

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