Interferencia de los anticuerpos anti-estreptavidina: ¿más común de lo que pensamos? En relación con seis casos confirmados

Los inmunoensayos automatizados se utilizan ampliamente en el diagnóstico rutinario de laboratorio de los problemas endocrinos debido a sus ventajas, equivalentes a una sensibilidad, precisión y especificidad excesivas. Sin embargo, estas estrategias están restringidas por la susceptibilidad de la respuesta inmunoquímica a diversas interferencias.

Pueden presentar interferencias asociadas al diseño del ensayo, por ejemplo, la presencia endógena de anticuerpos antiestreptavidina (ASA) en plataformas que utilizan la interacción biotina-estreptavidina. Hasta ahora, hay pocas experiencias en la literatura sobre la interferencia de ASA endógenos.

No obstante, estos anticuerpos podrían dar lugar a resultados falsamente reducidos o elevados de las hormonas, lo que podría dar lugar a diagnósticos incorrectos. Informamos de seis pacientes con exámenes de rendimiento de la tiroides poco comunes, incongruentes con sus hallazgos médicos.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
Biotium

Presentan concentraciones elevadas de T3 y T4 completas y valores de TSH en toda la gama de referencia cuando se miden en el Cobas 8000. Ninguna de las personas afectadas había estado tomando biotina; sin embargo, todas demostraron la presencia de ASA que provocaba resultados falsamente excesivos en los ensayos agresivos y además resultados falsamente bajos en los ensayos en sándwich.

El panel hormonal se analizó además en las mismas muestras utilizando una plataforma especial disponible en nuestro laboratorio: Cobas 6000. Se enviaron 9 muestras a un laboratorio externo para que las midieran con la metodología quimioluminiscente: Cera de parafina.

La interferencia parece tener efecto sobre el módulo e801 y los ensayos agresivos esencialmente sin afectar a los resultados obtenidos por esta metodología quimioluminiscente. Esta interferencia podría, sin duda, tener un efecto en otros ensayos realizados en la misma plataforma, como los de ATPO y estradiol.

Por último, los laboratorios deberían sospechar de la presencia de interferencias cuando no existe una correlación entre el perfil hormonal y la clínica de la persona afectada. El protocolo de neutralización de la biotina ha demostrado su eficacia para eliminar las interferencias de ASA.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Los anticuerpos endógenos contra la estreptavidina infligen resultados de laboratorio inexactos con más frecuencia de lo previsto


Todas las estrategias inmunológicas son débiles a diferentes tipos de interferencias. El objetivo de este trabajo fue revisar el desencadenamiento y la frecuencia de las interferencias dependientes del método en los inmunoensayos tiroideos de Roche. Las muestras de suero con exámenes de rendimiento de la tiroides (TFT) discordantes se han elegido a partir de las muestras enviadas al Laboratorio de Hormonas, Hospital Universitario de Oslo desde junio de 2013 hasta septiembre de 2018.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Reconocimos 93 pacientes con TFT patológicos discordantes cuando se analizaron con las estrategias de Roche y resultados regulares cuando se analizaron con varias estrategias. 42 de esas muestras han sido enviadas a Roche Diagnostics (Alemania) para la investigación de la sustancia interferente.

Roche descubrió que las interferencias eran atribuibles a la presencia de anticuerpos endógenos contra la estreptavidina (ASA) (34 de 42 pacientes), al rutenio o al idiotipo del anticuerpo marcado con rutenio (tres de 42 pacientes) y a antígenos de ratón (1 de 42 pacientes).

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier

Se calcula que las interferencias dependientes de la técnica afectan al 0,37% de los pacientes investigados en nuestro laboratorio. Las interferencias debidas a la presencia de AAS endógenos se han estudiado también en otros inmunoensayos (no tiroideos), evaluando las concentraciones de los analitos antes y después de la preadsorción de los sueros de los pacientes con perlas paramagnéticas recubiertas de estreptavidina.

Se observó una subestimación de los rangos hormonales en los inmunoensayos en sándwich, mientras que se produjo una sobreestimación en los ensayos agresivos. La interferencia dependiente de la técnica en los inmunoensayos de tiroides de Roche es provocada principalmente por el ASA y no es un fenómeno realmente infrecuente. Los resultados engañosos podrían dar lugar a un diagnóstico erróneo y a un tratamiento médico inadecuado. El proveedor del ensayo debe ser alertado cuando la metodología accesible revela errores dependientes del método.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier
Chicken thrombomodulin,TM ELISA KIT ELISA
QY-E80092 Qayee Biotechnology
Oxycodone ELISA
EK7130 BosterBio
Amphiphysin ELISA
LF-EK0189 Abfrontier

La estreptavidina facilita la internalización y la concentración pulmonar de un anticuerpo anti-células endoteliales (molécula de adhesión de células plaquetarias-endoteliales 1): un método para la inmunotransferencia vascular de medicamentos.


La conjugación de medicamentos con anticuerpos contra antígenos endoteliales del suelo es una posible técnica de suministro de fármacos al endotelio. Estudiamos los anticuerpos contra la molécula de adhesión plaquetaria-endotelial 1 (PECAM-1, un antígeno endotelial expresado de forma estable) como portadores para la inmunotransferencia vascular.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
ranavirus PCR kit
Bioingentech
Interference of anti - streptavidin antibodies: more common than we thought? In relation to six confirmed cases

Aunque el anti-PECAM marcado con 125I se adhiere con seguridad a las células endoteliales en la tradición, el anticuerpo fue poco internalizado por las células y se reunió poco después de la administración intravenosa en ratones y ratas. No obstante, la conjugación de anti-PECAM biotinilado (b-anti-PECAM) con estreptavidina (SA) estimuló notablemente la captación e internalización de anti-PECAM por las células endoteliales y por las células que expresan PECAM.

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
Magtivio
MagSi-WAX
Magtivio

Asimismo, la conjugación con estreptavidina estimuló notablemente la captación de b-anti-PECAM marcada con 125I en pulmones de rata perfundidos y dentro de los pulmones de animales intactos tras su inyección intravenosa o intraarterial. La enzima antioxidante catalasa conjugada con b-anti-PECAM/SA segura a las células endoteliales en la tradición, entró en las células, escapó a la degradación intracelular y protegió a las células contra el daño inducido por el H2O2.

Protein A protein
Fitzgerald
pLDH Protein Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

El anti-PECAM/SA/125I-catalasa se reunió dentro de los pulmones después de la inyección intravenosa o dentro de los pulmones de rata perfundidos y protegió estos pulmones contra el daño inducido por H2O2. Por lo tanto, la modificación de un anticuerpo pobre con biotina y SA proporciona un método para facilitar la concentración de fármacos mediada por anticuerpos. El anticuerpo PECAM/SA es un candidato prometedor para la inmunodirección vascular de medicamentos bioactivos.
Interferencia de los anticuerpos antiestreptavidina en los inmunoensayos: ¿un fenómeno poco común o un descubrimiento más frecuente?
Antecedentes Los anticuerpos antiestreptavidina (ASA) pueden provocar interferencias analíticas en determinadas plataformas de inmunoensayo. La estreptavidina se purifica a partir de la bacteria no patógena del suelo Streptomyces avidinii. A diferencia de la interferencia con la biotina, la interferencia con el ASA se supone que es mucho más rara.

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

Faltan investigaciones en profundidad sobre este tema. Posteriormente, llevamos a cabo una evaluación hacia la prevalencia y la posible razón subyacente detrás de esta interferencia. Estrategias Las concentraciones de inmunoglobulina G (IgG) y AS-IgM de la antiestreptavidina (AS) se decidieron en una serie de muestras de dos pacientes con interferencia de ASA y en 500 muestras aleatorias.

En un subconjunto de 100 muestras, se midió la hormona estimulante del tiroides (TSH) en un analizador Cobas antes y después de realizar un protocolo de neutralización que elimina el ASA. Se evaluó la relación entre la proporción de TSH después de la neutralización/TSH antes de la neutralización y el foco de ASA. Posteriormente, se analizó un extracto de las colonias de S. avidinii mediante electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio y poliacrilamida (SDS-PAGE) e inmunotransferencia.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1
Frit Kit
FRIT-KIT
Column Packing Kit
PACK-KIT

Resultados Se obtuvo una correlación constructiva entre las concentraciones de AS-IgM y la proporción de TSH. Ocho muestras de 500 superaron el valor de corte calculado de AS-IgM. En comparación con las concentraciones de AS-IgM en los habitantes, los títulos de las 2 circunstancias descritas destacaron claramente. Las circunstancias remotas caracterizan la punta de un espectro más amplio, ya que existe un continuo de reactividad AS-IgM dentro de los habitantes normales.

No pudimos observar ninguna variación en los patrones de inmunoblot entre las circunstancias y los controles, lo que puede señalar la presencia final de ASA en los habitantes. Conclusiones La interferencia como resultado del ASA es más frecuente de lo que se pensaba inicialmente y es atribuible a los anticuerpos IgM.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
Alpha Diagnostics
Frit Kit
Next Advance
Column Packing Kit
Next Advance

Fuentes

  1. Gentaur
  2. NCBI

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